质粒转染（质粒转染和慢病毒转染的区别）
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质粒转染会过滤吗
质粒转染不需要过滤。
因为所有都是可溶的。
加入P3后的离心就是除去不溶性蛋白。
但如果质粒被污染了，那是可以过滤一下的。但要保证质粒溶液体积、浓度够大。
质粒转染和病毒感染
随着分子生物学和细胞生物学研究的不断发展，转染已经成为研究和控制真核细胞基因功能的常规工具。在研究基因功能、调控基因表达、突变分析和蛋白质生产等生物学试验中，其应用越来越广泛。
1. 转染的分类：物理介导、化学介导和生物介导三类途径。
物理介导：电穿孔法、显微注射和基因枪法；
化学介导：经典的磷酸钙共沉淀法、脂质体转染方法、和多种阳离子物质介导的技术；
生物介导：较为原始的原生质体转染，和现在比较多见的各种病毒介导的转染技术。
2. 三种转染方法具体介绍：
电击法是在细胞上短时间暂时性的穿孔让外源质粒进入（实验条件控制较严、难度较大）；
脂质体法是利用不同的载体物质携带质粒通过直接穿膜或者膜融合的方法使得外源基因进入细胞（常用，质体与质粒的比例，细胞密度，转染的时间长短和培养基中血清的含量都影响转染效率）；
病毒法是利用包装了外源基因的病毒感染细胞的方法使得其进入细胞（前期准备较复杂、对细胞可能有较大影响）；
3.质粒：真核细胞细胞核外或原核生物拟核区外能够进行自主复制的遗传单位。
包括真核生物的细胞器（主要指线粒体和叶绿体）中和细菌细胞拟核区以外的环状脱氧核糖核酸(DNA)分子。
在基因工程中质粒常被用做基因的载体(Vector)，质粒上常有抗生素的抗性基因，例如氨苄抗性基因或 卡那霉素 抗性基因等。
4.病毒转染：外源基因有效地整合到宿主染色体上，从而达到持久性表达。可用于RNAi，cDNA克隆以及报告基因的研究，稳转细胞株的筛选，为活体动物模型实验。
慢病毒载体的包装系统一般由两部分组成，即包装成分和载体成分。前者能够反式提供产生病毒颗粒所必需的蛋白；后者同时具有异源启动子控制下的多克隆位点及在此位点插入的目的基因。
步骤： 1 ）构建载体 2 ）包装提纯病毒 3 ）感染靶细胞
为产生高滴度的病毒颗粒，需要利用表达载体和包装质粒同时共转染细胞，在细胞中进行病毒的包装，包装好的假病毒颗粒分泌到细胞外的培养基中，离心取得上清液后，可以直接用于宿主细胞的感染，目的基因进入到宿主细胞之后，经过反转录，整合到基因组，从而高水平的表达效应分子。
5. 质粒转染和病毒感染异同：
（1）质粒转染：相对简单的基因传递方式，与病毒载体主动进行细胞攻击侵染方式不同，质粒转染属于被动扩散。
优点：质粒载体构建流程相对简单，速度快（病毒载体都需要先构建载体后包装成病毒颗粒）
缺点：a.在细胞水平，质粒转染效率不稳定，不同细胞依照不同的转染方法和转染介质，效率差别较大，且大部分方法效率不高；
b.质粒转染一般入核效率低，特别是阳离子脂质体，阳离子聚合物等介质，电转质粒入核的效率则比介质转高不少，但比起慢病毒转染，效率仍然低很多，且对细胞损伤较大。
（2）病毒载体转染：病毒粒子是病毒壳（介导细胞转导/引入整合酶/介导体内靶向转导）+目的基因的复合物，不用或者用简单的试剂就能完成基因导入。
优点：转染效率高，应用不同的病毒载体工具可实现细胞和动物的高效转导和稳定转导。
缺点：不同的病毒载体的包装需要比较复杂流程和工艺优化，相对技术门槛较高。
什么是转染？为什么要质粒转染？
转染(transfection)：指真核细胞由于外源DNA掺入而获得新的遗传标志的过程。常规转染技术可分为瞬时转染和稳定转染（永久转染）两大类。
转染目的：研究你的目的片段到细胞内的表达。
转染一般是将目的基因构建到某个载体，将构建好的重组质粒导入细胞中，这样就能表达你所要的目的蛋白用于后续实验。
影响质粒转染效率的因素有哪些?
1、质粒大小和转染量：在一般情况下，随插入片段长度的增加转染效率降低；而转染效率在一定的范围内与质粒转染量呈正相关。
2、DNA质量：高质量的DNA对于转染的效率至关重要。如果质粒不纯会显著影响转染复合物的形成，进而影响转染效率。因此，可以选择提取纯度较高的试剂盒对DNA进行提取和纯化，以得到更高质量的DNA，从而提高转染效率。
3、转染试剂的选择：转染试剂将外源核酸片段导入细胞，影响内源基因表达水平。在转染实验前应根据实验要求和细胞特性选择适合的转染试剂，例如在绵羊成纤维细胞转染过程中FuGene HD的转染效率更高，GenEscortTM I对小鼠胶质细胞则具有更好的转染效果。总之，可以遵循高效、低毒等原则进行选择。
4、质粒与转染试剂比例：在一定范围内，转染效率与质粒/转染试剂比值成正相关，但毒性也会增加。可以根据转染试剂推荐比例确定合适的合适的转染比例。
5、细胞状态：维持细胞生长及健康旺盛是提高转染效率的重要条件。建议选择对数生长期的细胞为佳，此时期的细胞生长旺盛，可能得到更高的转染效率，切勿选择传代次数过多，基因型可能发生改变的细胞。
6、细胞密度：细胞密度过高或过低都会影响转染效果，过高则难以转染，过低则容易导致细胞死亡，因此需要选择合适的细胞融合密度进行转染，一般来说细胞密度在60%-80%时转染较为理想，但具体密度可参考转染试剂的说明书进行操作。
7、血清：血清中含有大量的蛋白质，可能会降低转染效率。一般的转染试剂会要求转染时使用无血清培养基进行转染，转染完成后更换完全培养基。但现在有些新的转染试剂血清的存在已不造成威胁，甚至还有助于提高转染效率，如阳离子聚合物等。
8、抗生素：抗生素，如青霉素和链霉素，一般是作为培养基中的添加物来防止细胞污染。这些抗生素对于真核细胞没有毒性，但是转染时有些转染试剂增加了细胞的通透性使抗生素进入细胞，可能会间接导致细胞死亡，从而降低转染效率。可以根据转染试剂的要求来选择是否在培养基中添加抗生素。
质粒DNA细胞转染注意事项
线性化还是超螺旋会影响转染结果：超螺旋质粒的转染效率比线性DNA高得多，特别是瞬时转染。而线性化DNA转染的整合几率高。质粒太大了转染会困难一些。毕竟，相对致密、较小的外源异物被细胞内吞的几率要大一些。
如果你的质粒正好比较大，又没有经验，选择特别注明可以转大质粒的转染试剂成功几率会高一些。有的转染试剂还会提供一些促进DNA凝聚的成分，使得DNA形成转染复合物时更致密一些，更容易转染一些。纯化质粒的质量也会影响转染效率，一定要选择高质量的质粒。
质粒转染和病毒转染有什么本质上的区别
两者在本质上并没有区别。
无论是质粒转染，还是病毒转染，均是真核细胞主动或被动导入外源DNA片段而获得新的表型的过程。随着分子生物学和细胞生物学研究的不断发展，转染已经成为研究和控制真核细胞基因功能的常规工具。在研究基因功能、调控基因表达、突变分析和蛋白质生产等生物学试验中，其应用越来越广泛。
随着基因与蛋白功能研究的深入，转染目前已成为实验室工作中经常涉及的基本方法。转染大致可分为物理介导、化学介导和生物介导三类途径。电穿孔法、显微注射和基因枪属于通过物理方法将基因导入细胞的范例；
化学介导方法很多，如经典的磷酸钙共沉淀法、脂质体转染方法、和多种阳离子物质介导的技术；生物介导方法，有较为原始的原生质体转染，和现在比较多见的各种病毒介导的转染技术。
扩展资料：
转染的原理：
外源基因进入细胞主要包括电击法、磷酸钙法、脂质体介导法和病毒介导法。电击法是在细胞上短时间暂时性的穿孔让外源质粒进入；磷酸钙法和脂质体法是利用不同的载体物质携带质粒通过直接穿膜或者膜融合的方法使得外源基因进入细胞；
病毒法是利用包装了外源基因的病毒感染细胞的方法使得其进入细胞。但是由于电击法和磷酸钙法的实验条件控制较严、难度较大；病毒法的前期准备较复杂、而且可能对于细胞有较大影响；所以现在对于很多普通细胞系，一般的瞬时转染方法多采用脂质体法。
利用脂质体转染法最重要的就是防止其毒性，因此脂质体与质粒的比例，细胞密度以及转染的时间长短和培养基中血清的含量都是影响转染效率的重要问题，通过实验摸索的合适转染条件对于效率的提高有巨大的作用。
参考资料来源：百度百科-转染
参考资料来源：百度百科-细胞转染
质粒转染的方法
RFect质粒DNA导入细胞有多种方法，包括物理介导（电穿孔法、显微注射和基因枪）、化学介导（磷酸钙共沉淀法、载体转染法等）和生物介导（原生质体转染、病毒介导的转染）三类途径。这三类技术中，又以载体转染法最为常用。国际上应用较早的转染载体多为脂质体类载体，但此类转染载体细胞毒性较大，转染效率往往也不够理想。近年类，纳米生物材料类载体的应用逐渐增多，此类载体最大的优点是细胞毒性较低，部分品牌载体的转染效率也显著优于脂质体类载体。
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